磷酸单酯水解酶（英語：Phosphoric monoester hydrolases或 phosphomonoesterases）是一种催化O-P键水解的酶，利用半胱氨酸残基或金属离子攻击磷原子来进行亲核取代反应。
这类酶的EC編號为：3.1.3.
例子包括：
- 酸性磷酸酶（acid phosphatase）
- 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）
- fructose-bisphosphatase
- glucose-6-phosphatase
- 磷酸果糖激酶2（phosphofructokinase-2）
- phosphoprotein phosphatase
- 钙调磷酸酶（calcineurin）
- 6-phytase
